Optimisation de la production de la Fraction Vasculaire Stromale (FVS) du tissu adipeux par dissociation mécanique: Analyse phénotypique et études des propriétés immunomodulatrices
Optimisation de la production de la Fraction Vasculaire Stromale (FVS) du tissu adipeux par dissociation mécanique: Analyse phénotypique et études des propriétés immunomodulatrices
Par Dr Paul GIRARD
Le Dr Paul Girard est chef de clinique au CHU de Rennes dans le service Chirurgie plastique reconstructrice et esthétique. Il travaille également au Centre Eugène Marquis, Centre de lutte contre le cancer à Rennes, et au CH de Saint-Malo.
L’utilisation du tissu adipeux (TA) en chirurgie plastique est à la fois un concept ancien et une technique en plein essor.
Initialement greffé en monobloc la lipoaspiration puis la technique de coleman ont diversifiés les indications, popularisant ainsi la technique de fat grafting
La découverte des Adipose derived Stromal Cells (ASC) en 2002 fait rentrer dans l’arsenal thérapeutique du médecin régénérateur la possibilité d’utiliser le TA non plus seulement en tant que substance de comblement mais véritablement comme produit de« régénération tissulaire »,
Les applications cliniques en thérapie cellulaire sont extrêmement prometteuses dans des domaines aussi variés que les maladies dysimmunitaires (Crohn, SEP, sclérodermie, polyarthrite rhumatoïde, diabète), ischémiques (infarctus myocarde, ischémie aiguë des membres inférieurs), le sepsis, la réaction greffe versus hôte, l’ingénierie tissulaire.
Cependant la production d’ASC a destinée de réaliser une thérapie cellulaire est longue plusieurs semaines, couteuses plusieurs milliers d’euros et est encadrée par un cadre législatif très rigoureux qu’est celui des Médicament de Thérapie Innovante Ceci e.st difficilement applicable en pratique courante au bloc opératoire.
Une alternative intéressante en clinique est l’utilisation de la fraction vasculaire stromale cette dernière est une suspension cellulaire obtenue après digestion du TA contenant l’ensemble des cellules composant le TA à l’exception des adipocytes, dont des ASC
Il existe 2 types de méthodes d’obtention de la FVS.
La première digestion enzymatique qui peut être réalisée directement au bloc opératoire par des dispositifs commerciaux permettant d’y réaliser de manière stérile une digestion enzymatique similaire à celle réalisée en laboratoire. Ces dispositifs notamment du fait du prix de l’appareil et des réactifs sont peu répandus (2500e)
La deuxième plus rapide et moins couteuse est la dissociation mécanique. Une méthode nous intéresse tout particulièrement du fait de sa simplicté , sa reproductibilité est la dissociation mécanique du TA par passages interseringues (appelée nanofat grafting dans la publication princeps)
Elle a fait preuve dans la littérature de son efficacité à produire un FVS contenant des ASC répondant aux critères de définition, en quantité et en qualité.
Le premier de mes objectifs a été d’essayer d’optimiser la technique de nanofat, en effet la publication initiale décrivait 30 passages interseringues la question était de déterminer si le nombre de passages pourrait avoir une incidence sur la composition cellulaire de la FVS,
Le 2ème volet descriptif était la réalisation d’une imagerie par microscopie confocale en immunofluorescence afin de déterminer la présence d’adipocytes résiduels dans les FVS produites
Un 3ème volet fonctionnel visait à déterminer l’effet des propriétés immunomodulatrices des ASC obtenues par ces techniques sur les macrophages acteurs clé de la régénération tissulaire
Ce travail est le premier à établir en détail la composition de la FVS du tissu adipeux chez l’homme
Dans l’optique de réaliser de la régénération tissulaire en un temps au bloc opératoire il met en évidence la supériorité de la FVS obtenue par dissociation mécanique par 20 interseringues en terme de rendement :
- en macrophages acteurs clé de la régération tissulaire,
- en cellules endothéliales favorisant un environnement pro angiogénique
- en ASC aux propriétés anti inflammatoires, immunomodulatrices.,
- et aux capacités de clonogénicité augmentées
L’ensemble de ces éléments associé à des coûts de production négligeables comparés à une digestion enzymatique en laboratoire ou par Celution® (2400$ par manipulation ) font de la méthode de dissociation mécanique par 20 passages interseringues un acteur incontournable de l’obtention de FVS pour toutes les indications de régénération tissulaire par injection de la FVS en intra tissulaire pur.
Cependant, la présence d’adipocytes résiduels en son sein n’en fait pas le gold standard pour toutes les indications, le risque d’embolie graisseuse contre indiquant toute utilisation systémique.
